На этот раз действие игры закидывает нас в Италию эпохи 1476-го года. Должность главного героя отныне занимает не Альтаир, а некий флоренцианский представитель знати Эцио Аудиторе де Фиренце, который так же является предком Десмонда, из генов которого ученые до сих пор качают ценную информацию. Помогать нашему герою будут такие известные личности как Леонардо да Винчи, Катерина Сфорца, Николло ло Макиавелли и другие. Да Винчи подсобит своими чудо-изобретениями. Теперь у Эцио будет два скрытых кинжала - по одному в каждой руке. Катерина Сфорца будет вам помогать с итальянской политической сцены, а Макиавелли всегда посоветует, как убить цель тихо и без лишнего шума. Но не все исторические личности будут нам помогать. Врагов в игре тоже хватает, а нажить новых - не составляет никакого труда. Так нам предстоит устроить покушение на жизнь Лоренцо де Медичи - очень влиятельного итальянского политика.